scarabgenomics C-0185-05K說明書

MDS™42ΔrecA化學(xué)感受態(tài)細胞試劑盒

：MDS™42ΔrecA化學(xué)感受態(tài)細胞試劑盒

· 維持和繁殖不穩(wěn)定的克隆和質(zhì)粒 - 攜帶直接重復(fù)序列，反向重復(fù)序列或?qū)е旅黠@的二級“莖 - 環(huán)”結(jié)構(gòu)的其他序列的pDNA載體在標準大腸桿菌宿主中通常是不穩(wěn)定的。CleanGenome® 大腸桿菌菌株經(jīng)常用于克隆在其他菌株中遭受不需要的重組事件的序列。

· 準確的質(zhì)粒復(fù)制 - 從CleanGenome® 大腸桿菌菌株中刪除了重組或移動DNA元件，如插入元件，以確保您的構(gòu)建體的忠實復(fù)制。

· 克隆和表達“有害”基因 - 清除Genome® 大腸桿菌菌株的自然防御系統(tǒng)，例如IS變異“有害”基因以阻止對生物體的壓力，已被刪除，因此它們不會干擾您的實驗。

· 更高的蛋白質(zhì)產(chǎn)量 - 從CleanGenome® 大腸桿菌菌株中去除不必要的基因，重新定向細胞的能量，使更多的目標和隱藏的原噬菌體的清除，防止細胞裂解，因此您的蛋白質(zhì)留在細胞內(nèi)。

· 比標準T7表達菌株更低的背景誘導(dǎo)-T7 RNA聚合酶基因處于修飾的lac啟動子/操縱子系統(tǒng)的控制之下，其增強了LacI阻遏蛋白賦予的靈敏度和抑制程度。

· 使用T7載體進行蛋白質(zhì)表達 - 無需再克隆，使用CleanGenome® 大腸桿菌宿主中現(xiàn)有的T7克隆。

背景

使用合成生物學(xué)方法，通過進行一系列計劃的，的缺失來減少大腸桿菌K-12基因組。多重缺失系列（MDS™）菌株（1），基因組減少高達15％，通過鑒定非必需基因和消除序列，包括重組或移動DNA和神秘毒力基因，同時保持強勁生長而設(shè)計和蛋白質(zhì)生產(chǎn)。基因組減少還導(dǎo)致意想不到的有益特性，包括高電穿孔效率和重組基因和在其他菌株中不穩(wěn)定的質(zhì)粒的準確繁殖。隨后的缺失和有用等位基因的引入產(chǎn)生適合于許多分子生物學(xué)應(yīng)用的菌株。

數(shù)據(jù)

圖1：多個缺失菌株耐受“有害”基因。 
由霍亂毒素B亞單位（CTX）融合的兔出血癥病毒VP60組成的嵌合基因在大腸桿菌中非常不穩(wěn)定。單獨地，兩個基因在E中都是穩(wěn)定的。大腸桿菌HB101，C600和DH10B，但在相同宿主中攜帶融合基因的pCTXVP60不產(chǎn)生融合蛋白，并且以低產(chǎn)率回收。所有回收的質(zhì)粒都含有CTXVP60開放閱讀框中的突變，幾乎全部來自IS插入。相反，重組質(zhì)粒在MDS TM中*穩(wěn)定; 獲得了正常的質(zhì)粒DNA產(chǎn)量。pCTXVP60的代表性限制性模式。（A）將來自MDS TM 42的質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化并在的宿主中繁殖，然后用NcoI和EcoRI消化。純化每個限制性模式的代表并測序。M，分子量標記，1 kbp階梯; 1，MDS™41，無插入; 2，MDS™42，無插入; 3，DH10B，IS 10插入; 4，DH10B，IS 10插入/缺失; 5，C600，IS5插入; 6，C600，IS1插入; 7，C600，IS 1插入。（B）對于所呈現(xiàn)的五個實例確定的CTXVP60閱讀框中IS元件插入位點的相對位置。
 

圖2：不同宿主菌株中的質(zhì)粒穩(wěn)定性。 
左：在pT-ITR的四次傳代培養(yǎng)期間，具有病毒LTR區(qū)段的質(zhì)粒; 泳道0，傳代培養(yǎng)前分離的質(zhì)粒DNA，泳道1-4，連續(xù)傳代培養(yǎng)。用限制酶消化質(zhì)粒DNA，并通過瓊脂糖凝膠電泳分析。KpnI在單個位點切割質(zhì)粒，但在MG1655中，兩個條帶表明質(zhì)粒缺失。MscI在兩個位置切割，但在MG1655中，第三個中間帶確認質(zhì)粒被刪除。右圖：慢病毒表達質(zhì)粒的四種變體在MDS TM42ΔrecA和Stbl3 TM（Life Technologies）中的穩(wěn)定性，顯示含有完整質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化體的比例（表2 BioTechniques 43：466-470（2007年10月））（2）。

產(chǎn)品規(guī)格

試劑盒組分 
MDS™42Δ 的recA化學(xué)感受態(tài)細胞
的pUC19對照DNA（10微克/微升）
的SOC培養(yǎng)基

基因型 
MG1655多缺失菌株（1），Δ 的recA 1819 
的recA基因 1819突變是Δ的*缺失的recA。

質(zhì)量控制 
使用pUC19對照DNA測試轉(zhuǎn)化效率，一式兩份進行。將轉(zhuǎn)化的細胞接種在含有50μg/ ml羧芐青霉素的LB平板上。轉(zhuǎn)化效率= 1×10 ⁸ cfu /μgDNA。

儲存條件將 
組分儲存在-80°C。不要將細胞儲存在液氮中。

scarabgenomics中國代理,scarabgenomics上海代理，scarabgenomics北京代理，scarabgenomics廣東代理，scarabgenomics江蘇代理scarabgenomics湖北代理,scarabgenomics天津代理,scarabgenomics黑龍江代理,scarabgenomics湖南代理scarabgenomics內(nèi)蒙古代理,scarabgenomics吉林代理,scarabgenomics福建代理,scarabgenomics江蘇代理,scarabgenomics浙江代理,scarabgenomics四川代理,scarabgenomics代理，

上海起發(fā)實驗試劑有限公司是實驗試劑一站式采購服務(wù)商

1：強大的進口輻射能力，血清、抗體、耗材、大部分限制進口品等。

2：產(chǎn)品種類齊全，經(jīng)營超過700多品牌，基本涵蓋所有生物實驗試劑耗材。

3：提供加急服務(wù)，貨品一般1-2周到貨。

4：富有競爭良好的信譽，大部分客戶提供貨到付款服務(wù)。客戶包括清華、北大、交大、復(fù)旦、中山等100多所高校，ROCHE，阿斯利康、國藥、fisher等知藥企。

6：我們還是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,quickzyme,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech；sysy,TriLink BioTechnologies,Inc；worthington-biochem,zyagen等幾十家國外公司授權(quán)代理。

7：我們還是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等知*批發(fā)，歡迎合作。