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bellbrooklabs Transcreener® HTS Assays

更新時間:2020-04-23      點擊次數:1962

 

 

bellbrooklabs Transcreener® HTS Assays

使用核苷酸的直接檢測和均一的熒光讀數對酶進行通用的高通量篩選測定。

TRANSCREENER ADP 2分析

激酶測定

ATP酶測定

TRANSCREENER AMP 2 / GMP 2分析

磷酸二酯酶測定

連接酶和合成酶檢測

糖基轉移酶測定

甲基轉移酶測定

交易者GDP檢測

GTPase檢測

GAP檢測

GEF分析

糖基轉移酶測定

TRANSCREENER UDP 2分析

糖基轉移酶測定

傳送者 CGAMP檢測

cGAS分析

TRANSCREENER ADO CD73分析

CD73檢測

成千上萬個目標的分析。

  • Transcreener檢測依賴于核苷酸的直接免疫檢測,與復雜的酶聯檢測方案相比,它不易受到干擾的影響。
  • 四種類型的Transcreener核苷酸檢測測定法使您可以更快,更高效地篩查數千種目標酶。
  • 您可以選擇FP,FI和TR-FRET讀數;所有產品均帶有深紅色熒光,并在主要的多模式閱讀器上具有經過認證的性能。
  • 均質,混合和讀取格式可用于終點分析或連續監測酶活性。
  • 過夜的試劑和信號穩定性意味著可以在大型自動化屏幕中獲得可靠,可靠的篩選數據。

Transcreener:工作原理

Transcreener是一種通用的測定方法,可用于整個核苷酸依賴性酶家族。無需對大量特定的反應產物(例如磷酸化的蛋白質或脂質)使用單獨的測定法,而是可以將單核苷酸檢測測定法用于產生共同核苷酸產物的所有酶。例如,ADP檢測可用作任何蛋白質,脂質或碳水化合物激酶的通用激酶測定方法。

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Transcreener分析法依靠使用能夠基于單個磷酸基團區分核苷酸的抗體直接,高度特異性地檢測核苷酸。產物核苷酸相對于底物的選擇性(例如,激酶測定的ADP相對于ATP的選擇性)為150倍至1000倍以上。這種*的選擇性允許在底物核苷酸過量的情況下檢測核苷酸酶產物(例如,在激酶測定中存在過量ATP的情況下進行ADP檢測),這是測量酶初始速度的必要條件。

為了產生信號,Transcreener分析使用均質的競爭性免疫分析形式,其中抗體與高親和力熒光示蹤劑配對。示蹤劑被檢測到的核苷酸置換會導致其熒光性質發生變化。FP分析是簡單的方法。它只需要示蹤劑和未修飾的抗體;極化的變化是由示蹤劑移動時增加的旋轉遷移率引起的。對于TR-FRET和FI格式,抗體與分子結合,該分子在結合時會改變示蹤熒光的強度,而在置換示蹤劑時會失去這種效果。

Transcreener:為什么直接檢測對HTS更好

與任何其他核苷酸檢測分析法相比,轉導分子測定法試劑更少,機制也更簡單,后者通常需要偶聯酶才能將核苷酸轉化為可以通過報告酶產生信號的產物。每種偶聯和報告酶都是被篩選化合物的潛在靶標,這會增加假陽性或缺失命中的風險,并需要額外的孔來進行反篩選。(某些ADP檢測方法甚至使用激酶作為偶聯酶,這進一步使它們在激酶抑制劑篩選中的使用變得復雜。)

混合閱讀簡單

直接檢測還意味著該方案是簡單,靈活的方案:運行您的酶反應,在停止混合的情況下添加Transcreener試劑,并讀取板。或者可以在酶反應開始時添加Transcreener檢測試劑,以連續監測酶活性。例如,通過“跳躍稀釋”激酶測定法測量抑制劑的停留時間。一些耦合方法需要額外的液體添加和溫育步驟,這會使化驗自動化變得復雜,并使其無法以連續模式運行。

用生化分析方法測量藥物靶標停留時間的指南

用生化分析方法測量藥物靶標停留時間的指南

 

出色的試劑穩定性-簡化篩選

所有Transcreener抗體和示蹤劑以及測定信號在室溫下至少穩定8小時。這樣可確保即使在大型的自動屏幕中,數據質量也不會受到影響,因為在這種情況下,檢測混合物可能會在室溫下長時間存放在分配臺中。由于偶聯酶的不穩定性,其他核苷酸檢測測定法具有更嚴格的解凍后儲存要求。此外,與某些耦合酶測定法產生的瞬態信號不同,Transcreener熒光信號至少會持續一整夜-持續數天-因此,在添加檢測試劑后很長時間即可讀取板。出色的試劑和信號穩定性使Transcreener分析非常可靠,易于在自動化HTS環境中使用。

Transcreener:您可以用它做什么

成千上萬的細胞反應使用核苷酸,包括大多數催化蛋白質翻譯后修飾(例如磷酸化和甲基化)的酶。由于它們在信號轉導中的核心作用,許多PTM酶已成為藥物靶標。盡管蛋白激酶受到廣泛的關注,但是乙酰基轉移酶,甲基轉移酶和糖基轉移酶也是經過臨床驗證的靶標,并且還有更多與PTM相關的藥物正在研發中。開發了Transcreener檢測試劑盒,以使HTS能夠靶向PTM酶以及其他類型的核苷酸依賴性酶,包括ATPase,GTPases和磷酸二酯酶。

Transcreener Assays已開發并不斷改進,可用于工業HTS環境。自2006年推出以來,它們已在使用的所有主要多模式讀板器中,在96,384或1536孔板上的超過6,000萬孔抑制劑篩選,分析和機理研究中使用。在激酶測定中使用ADP檢測占了這些孔的一半以上,這些用戶中的大多數在將Transcreener與其他測定方法進行比較后決定使用Transcreener。對于許多非典型目標-糖基轉移酶,解旋酶,羧化酶,GTP酶,連接酶,僅舉幾例-沒有很好的選擇,并且Transcreener確實是一項真正的使能技術。沒有它,屏幕可能不會前進。

無論目標是什么,在底物轉化率的整個范圍內,底物轉化率均小于10%(通常低得多)時,所有Transcreener分析均會產生大于0.7的Z'值。它們在很大程度上不受酶測定中使用的大多數試劑的影響,并且信號至少在一夜之間是堅如磐石的。我們已經與主要的多模式儀器供應商合作,包括Tecan,BMG,Biotek和Molecular Devices,以優化儀器的硬件和軟件設置,以利用每種Transcreener Assays實現佳性能。每種Transcreener分析的技術手冊中都總結了佳的過濾器設置和儀器設置,更多的詳細信息請參見應用手冊。這樣可以確保無論您喜歡哪種熒光檢測模式或閱讀器,

 

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