預(yù)涂層 96 孔微孔板

標(biāo)準(zhǔn)

標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液

洗滌緩沖液

檢測(cè)試劑A

檢測(cè)試劑B

稀釋劑 A

稀釋劑 B

TMB基板

停止解決方案

封板機(jī)

37°C 培養(yǎng)箱

多通道和單通道移液器和無菌移液器吸頭

噴瓶或自動(dòng)微孔板清洗機(jī)

1.5 毫升試管

蒸餾水

吸水濾紙

100 毫升和 1 升量筒

酶標(biāo)儀（波長(zhǎng)：450 nm）

ELISA 搖床

1) 標(biāo)準(zhǔn)品：用推薦體積的標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液配制標(biāo)準(zhǔn)品，制成標(biāo)準(zhǔn)溶液。然后按照協(xié)議中的說明，使用標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行系列稀釋。

2) 洗滌緩沖液：按照方案中的說明，用蒸餾水稀釋濃縮的洗滌緩沖液。

3) 檢測(cè)試劑制備：計(jì)算所需工作溶液的總體積。分別用稀釋劑 A 和稀釋劑 B 以 1:100 稀釋檢測(cè)試劑 A 和檢測(cè)試劑 B。

1) 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)、測(cè)試樣品和對(duì)照孔。

2) 將 100 µl 稀釋標(biāo)準(zhǔn)品分裝到標(biāo)準(zhǔn)孔中。

3) 將 100 µl 標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液分裝到對(duì)照（零）孔中。

4) 將 100 µl 稀釋樣品分裝到樣品孔中。在 37 °C 下孵育 1 小時(shí)。

5) 將 100 µl 檢測(cè)試劑 A 分裝到每個(gè)孔中。在 37 °C 下孵育 1 小時(shí)。

6) 洗滌 3 次。

7) 將 100 µl 檢測(cè)試劑 B 分裝到每個(gè)孔中。在 37°C 下孵育 30 分鐘。

8)洗滌5次。

9) 將 90 µl TMB Substrate 分裝到每個(gè)孔中。在 37°C 下孵育 10-20 分鐘。

10) 分裝 50 µl 終止液。

11) 在 450 nm 處測(cè)量 OD。

使用前將套件組件和樣品平衡至室溫 (18 - 25 °C)。建議為每個(gè)測(cè)試?yán)L制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1. 在預(yù)涂板上分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)孔、測(cè)試樣品孔和對(duì)照（零）孔，然后記錄它們的位置。建議至少測(cè)量每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)和樣品一式兩份。

2. 將 100 µL 每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品加入適當(dāng)?shù)目字小Ｓ蒙w子密封板并在 37°C 下孵育 1 小時(shí)。

3. 取下蓋子并丟棄液體。

4. 每孔加入 100 µl 檢測(cè)試劑 A 工作溶液。用蓋子密封板并在 37°C 下孵育 1 小時(shí)。

5. 取下蓋子并丟棄溶液。用 1X 洗滌緩沖液洗滌板 3 次。

6. 每孔加入 100 µL 檢測(cè)試劑 B 工作溶液，密封并在 37°C 下孵育 30 分鐘。

7. 棄去溶液并用洗滌緩沖液洗滌板 5 次，如上一步所述。

8. 將 90 µl TMB Substrate 分裝到每個(gè)孔中。用蓋子密封板并在 37°C 下孵育 10-20 分鐘。避免暴露在光線下。孵育時(shí)間僅供參考，最佳時(shí)間應(yīng)由最終用戶確定。不要超過 30 分鐘。

9. 每孔加入 50 µL 終止液。立即在 450 nm 處讀取。