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Cygnus產品及應用選擇指南

更新時間:2011-10-07      點擊次數:5578

Cygnus產品及應用選擇指南

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       部分藥品來源于生物組織,但產量有限,所以其價格十分昂貴。微生物/細胞生長迅速,容易控制,適于大規模工業化生產。利用基因工程將合成相應藥物成分的基因導入細胞內,讓其產生相應的藥物,不但能解決產量問題,還能大大降低生產成本。

                                           基因工程圖

                      

 

        基因工程大大改變了現有制藥生產的狀況,但是基因工程產品中殘留的宿主細胞蛋白是影響制品純度的重要因素,反復使用含宿主細胞蛋白的基因工程制品有可能引起機體的過敏反應。目前應用于人類疾病治療或疾病預防的基因工程主要采用中國倉鼠卵巢細胞(CHO)作為宿主細胞。因制品中細胞蛋白殘留量低 ,用常規的理化方法無法檢測,為此需要建立細胞蛋白殘留量測定方法,對半成品進行檢定,從而更有效地保證制品的質量 ,提高制品的安全性。

        Cygnus technologies, Inc.是美國一家專門從事生物工程和制藥過程中殘留物檢測的一系列產品。生物制品生產過程中存在許多影響產品質量的殘留物,諸如特殊重組表達系統中宿主細胞蛋白( Host Cell protein, HCP )的殘留以及生物制品加工過程中培養物殘留的污染物。公司提供了廣泛而靈敏度*的一系列用于檢測生物工程殘留物的產品,

        Cygnus公司檢測產品覆蓋了常用于基因工程的培養細胞以及一些用于細胞培養的添加物。CHO細胞即中國倉鼠卵巢細胞(Chinese hamster ovary),該細胞具有不死性,可以傳代百代以上,是目前生物工程上廣泛培養的細胞。*批準正式應用于人類疾病治療或疾病預防的基因工程產品約有三十多種,其中只有一種(乙肝疫苗)是由酵母菌生產的,其余所有產品都是由CHO細胞和大腸桿菌生產的,大腸桿菌不能形成有活性的二聚體(如白介素2),也不具有糖基化的功能(如EPO),而CHO卻具有如上的功能,因此CHO成為表達復雜生物大分子的理想宿主。另外CH0細胞在基因工程使用中還有一個優點,該細胞屬于成纖維細胞(fibroblast),是一種非分泌型細胞,它本身很少分泌CHO內源蛋白,因而檢測起來很困難。

 

一、     Cygnus Elisa檢測產品

        共有39種Elisa 檢測試劑盒,包括原核、真核表達細胞宿主蛋白檢測試劑盒,細胞培養殘留物檢測試劑盒等。

公司產品:

 貨號  貨名
 F015  CHO HCP ELISA kit(中國倉鼠卵巢細胞)
 F410

 E.coli HCP ELISA Kit(大腸桿菌)

 F140  Pichia pastoris HCP ELISA Kit(畢赤酵母)
 F030  BSA ELISA kit
 F050  Protein A ELISA kit
 F050H  Protein A-h ELISA kit (human IgG)
 F400  Protein A ELISA kit

 

1.CHO HCP ELISA kit(F015)

zui常用的用于檢測中國倉鼠卵巢細胞宿主蛋白試劑盒。

1)CHO HCP ELISA kit(F015)盒子組成

 

2)操作流程(中文操作流程僅供參考,實驗請參照原裝英文說明書)

客戶可以根據檢測靈敏度的需要,選擇其中一種檢測方法。

 

兩種操作方法的比較:

   Rapid protocol   High sensitivity protocol
 標準品  0,4,20,75,250ng/ml  0,1,4,20,75ng/ml
 檢測耗時  2+1.5=3.5h  2+2+1.5=5.5h
 靈敏度  2 ng/ml   <500pg/ml

 

2. E.coli HCP ELISA kit(F410)

針對利用E.coli生產相關藥物的客戶,檢測大腸桿菌宿主蛋白殘留物的利器。

1)E.coli HCP ELISA kit(F410)盒子組成

2)操作流程(中文操作流程僅供參考,實驗請參照原裝英文說明書)

 

 

3. Pichia pastoris HCP ELISA kit(F140)

真核表達系統(畢赤酵母)宿主細胞殘留物檢測試劑盒。

1)Pichia pastoris HCP ELISA kit盒子組成

 

2)兩種不同的操作流程

 

兩種操作方法的比較:

   Rapid protocol  Standard protocol
 標準品  0,4,20,75,250ng/ml  0,1,4,20,75ng/ml
 檢測耗時(h)  1+0.5=1.5  3+0.5=3.5
 靈敏度  <75 ng/ml  <0.3 ng/ml

 

4. BSA ELISA kit (F030)

細胞培養添加物BSA的檢測試劑盒。

1)BSA ELISA kit (F030)盒子組成

 

2)操作步驟

 

5. Protein A的檢測試劑盒

針對開發抗體藥,檢測純化過程中殘留的Protein A,也有其他相關應用,分為三款F050、F050H和F400,其中F400是產品,是靈敏度zui高、效果的檢測Protein A的試劑盒。

1)三個試劑盒的組成

 

 

2)三個試劑盒的差別

 貨號  標記系統  底物  靈敏度  檢測對象  處理步驟
 F050  生物素,

AP偶聯的抗體

 PNPP  120pg/mL  重組的Protein A  無熱處理
 F050H  

生物素,

AP偶聯的抗體

 PNPP  100pg/mL  人源化的Protein A  熱處理
 F400  HRP  TMB  50pg/mL  重組修飾的Protein A  熱處理

 

二、Cygnus WB檢測產品

        WB也是檢測宿主細胞蛋白的手段,Cygnus的WB kits里的抗體跟相應的Elisa Kits是一樣的,WB kits里面包括酶標抗體、陽性抗原、酶底物和封閉濃縮液,Cygnus的WB產品共有11種。具體產品可以參照下列(http://www.cygnustechnologies.com/category/western-blot-kits.html

部分WB產品:

 貨號  品名  種屬性  對應的Elisa
 F415  E.coli HCP WB kit  Bacterial  F410
 F145  Pichia pastoris HCP WB kit  Yeast  F140
 F185  SP2/0 HCP WB kit  Mammalian  F180
 F060  CHO HCP WB kit  Mammalian  F015

 

三、 Cygnus免疫學產品

       免疫學產品全部是Elisa和WB盒子里面的相關產品,提供抗體、抗原濃縮液(對照/標準品)、緩沖液和洗滌液等。

       大部分抗體為山羊和兔來源,偶有豬抗,抗體貨號有前后綴,不同后綴代表的意思不同。Cygnus抗體共有117種,眾多抗體產品參照下列*:http://www.cygnustechnologies.com/category/antibodies.html

抗體的前綴/后綴代表的意義:

       PA或者PG是IgG片段

       AF是親和純化的抗體

       AF-AP偶聯了AP的親和純化抗體

       AF-B偶聯了生物素的親和純化抗體

       AF-HRP是偶聯了HRP的親和純化抗體

下面為部分抗體產品:

貨號   貨名  類型

規格

 A549  anti-A549 HCP  Goat, neat serum  1 ml
 A549-AF  anti-A549 HCP  Goat, affinity purified  1 mg
 A549-PA  anti-A549 HCP  Goat, IgG fraction

 1 ml

 C0016AF-HRP  anti-CHO HCP  Goat , affinity purified:HRP  1 mg
 C0016  anti-CHO HCP  Goat, neat serum  1 ml
 AP117  anti-E.coli HCP  Goat, affinity purified  1 mg
 AF117B  anti-E.coli HCP  Goat,affinity purified:biotinylated  1 mg
 PI-49  anti-P. pastoris HCP  Goat, neat serum  1 ml
 PI-49AF-AP  anti-P. pastoris HCP  Goat,affinity purifed:alkaline phosphatase labeled  1 ml

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