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ComplementTech A120說(shuō)明書(shū)

更新時(shí)間:2023-08-31      點(diǎn)擊次數(shù):944

ComplementTech A120說(shuō)明書(shū)


ComplementTech成立于 2005 年,前身是Advanced Research 技術(shù)公司,ART公司成立于1993年,是一家有著20多年補(bǔ)體研發(fā)和生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)的生物制品公司,為用戶提供zui高質(zhì)量的補(bǔ)體類(lèi)產(chǎn)品及其它生物試劑產(chǎn)品。ComplementTech公司領(lǐng)導(dǎo)均是有數(shù)十年在科研機(jī)構(gòu)從事補(bǔ)體領(lǐng)域研究的科學(xué)家,確保了公司產(chǎn)品的地位和*品質(zhì)。ComplementTech 致力于通過(guò)就補(bǔ)體試劑在補(bǔ)體領(lǐng)域以及其他相關(guān)科學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用中的使用提供技術(shù)建議和專(zhuān)業(yè)知識(shí)來(lái)推進(jìn)醫(yī)學(xué)研究。

名稱(chēng): C5蛋白


編號(hào): A120


規(guī)格: 250 µg/vial


濃度: 1.0 mg/mL (實(shí)際濃度見(jiàn)分析證書(shū))


類(lèi)型 冷凍液體


活動(dòng): >值為80%,與正常人血清標(biāo)準(zhǔn)相比。


純度: >95%由SDS-PAGE


緩沖區(qū): 10 mM磷酸鈉,145 mM氯化鈉,pH 7.2


消缺系數(shù)。 A280 nm在1.0 mg/mL時(shí)的=為1.03


分子量: 190000Da (2鏈)


防腐劑: 無(wú),0.22µm過(guò)濾


存儲(chǔ): - 7 0oC或以下。避免凍融。


根源 正常的人類(lèi)血清 (經(jīng)認(rèn)證的HBsAg、HTLV-I/II、STS和HCV、 HIV1和HIV-II抗體檢測(cè)均為陰性) 。


預(yù)防措施 在處理人類(lèi)血液制品時(shí)要采取常規(guī)的預(yù)防措施。


一般說(shuō)明


天然人類(lèi)C5是一種天然糖基化 (1.6%) 多肽,包含兩個(gè)二硫鍵鏈。C5對(duì)于膜攻 擊復(fù)合物 (MAC) 的形成是必不ke少的,并可被補(bǔ)體激活的所有三種途徑激活。補(bǔ)體 激活的每個(gè)途徑都產(chǎn)生蛋白水解酶復(fù)合物 (C3/C5轉(zhuǎn)化酶) ,它們與目標(biāo)表面結(jié)合   (Ross,G。D. (1986)).這些酶在C5的較大的阿爾法鏈中切割一個(gè)肽鍵,釋放高效的 過(guò)敏性毒素C5a (74個(gè)氨基酸) 并激活C5b。這是C5b-9復(fù)合物組裝過(guò)程中唯yi的蛋白 水解步驟。C5b是不穩(wěn)定的,但它仍然與激活復(fù)合物結(jié)合短暫的時(shí)間 (~2分鐘) ,在 此期間,它要么與周?chē)后w中的一個(gè)C6結(jié)合形成C5b,6,要么衰變并聚集,不再能夠 形成MAC。C5b,6復(fù)合物也可能繼續(xù)與C3/C5轉(zhuǎn)化酶結(jié)合,其中單個(gè)C7的結(jié)合暴露了一 個(gè)膜結(jié)合區(qū)域,而C5b,6,7可以部分插入靶細(xì)胞的膽脂層。到目前為止,該復(fù)合物可 能會(huì)從目標(biāo)細(xì)胞擴(kuò)散出去,進(jìn)入附近細(xì)胞的細(xì)胞膜。這被稱(chēng)為旁觀者裂解或“反應(yīng)性 裂解" ,可以是一個(gè)重要的病理來(lái)源。每個(gè)C5b-7復(fù)合物都可以結(jié)合一個(gè)C8蛋白分子 ,從而使該復(fù)合物更牢固地插入到細(xì)胞膜中。這個(gè)復(fù)合物與C9結(jié)合,每個(gè)結(jié)合的C9可 以結(jié)合另一個(gè)C9,起始形成一個(gè)包含多達(dá)18個(gè)C9分子的環(huán)狀結(jié)構(gòu)(Podack,E。       R. (1984)).具有一個(gè)或多個(gè)C9的C5b-9復(fù)合物被稱(chēng)為補(bǔ)體的膜攻擊復(fù)合物 (MAC) 。  并不是所有的C5b-8配合物都有完整的C9環(huán),平均每個(gè)C5b-8配合物只有3個(gè)C9。C9的 完整的蛋白環(huán)形成了電子顯微鏡上看到的孔,它們導(dǎo)致代謝物和小蛋白質(zhì)泄漏出細(xì)胞 ,以及水進(jìn)入細(xì)胞。如果將足夠數(shù)量的水插入細(xì)胞膜,那么由于滲透壓,流入細(xì)胞的 水就會(huì)使細(xì)胞膜破裂,使目標(biāo)細(xì)胞 (或一個(gè)旁觀者細(xì)胞) 的全部?jī)?nèi)容物被釋放出來(lái)。 任何一種過(guò)程都可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡。最初人們認(rèn)為每個(gè)細(xì)胞只需要一個(gè)C5b-9復(fù)合物( 被稱(chēng)為裂解的“一打擊理論"(隆美爾F。A.和梅耶爾,M.M. (1973) ),但這可能是不正確的。例如,一個(gè)紅細(xì)胞需要大約850個(gè)C5b-9 復(fù)合物,通過(guò)C7分子的數(shù)量來(lái)衡量,才能發(fā)生裂解(Bauer,J。以及其他人     (1979)).受CD59保護(hù)的抗MAC的宿主細(xì)胞需要足夠數(shù)量的C5b-9來(lái)捆綁所有的CD59 ,然后再捆綁大約850個(gè)C5b-9。有核細(xì)胞的裂解需要更多的C5b-9復(fù)合物,因?yàn)?它們的大小和在這些細(xì)胞中存在多種防御機(jī)制。


物理特性和結(jié)構(gòu)


分子量:  190,000 Da,由兩個(gè)二硫鍵連接鏈組成。阿爾法鏈?zhǔn)?115,000 Da , 貝塔鏈?zhǔn)?5,000 Da 。阿爾法鏈和阿爾法鏈?zhǔn)峭ㄟ^(guò)一個(gè)二硫鍵連接起來(lái)的。C5 的 pI為4.7到5.5。


C3/C5轉(zhuǎn)化酶切割C5,從alpha鏈的n端釋放C5a ( 一個(gè)74個(gè)氨基酸片段,8268 Da去糖基化,10400+1000糖基化) 。C5b片段 (181,000 Da) 與C6結(jié)合,啟動(dòng)膜攻擊 復(fù)合物的自發(fā)組裝。


CAS編號(hào):80295-53-0


 測(cè)定


C5zui簡(jiǎn)單的檢測(cè)方法是使用C5耗盡的人血清,并測(cè)量EA (經(jīng)典途徑) 或Er (替 代途徑) 的裂解,作為添加的測(cè)試樣品或標(biāo)準(zhǔn)純化C5濃度的函數(shù)。每個(gè)du特的應(yīng)用程 序都可能需要確定適當(dāng)?shù)臈l件。然而,一個(gè)典型的檢測(cè)方法包括在濕冰上混合25µL  C5-Dpl,含c5的樣品用GVB++稀釋到1到10 ng C5,以及足夠的GVB++使體積達(dá)到300µL 。EA (3 X 107最后加入200µL)。純化的C5或正常的人血清 (NHS) 可作為C5的來(lái)源。 將反應(yīng)混合物在37個(gè)條件下孵育30 mino加入C和1 mL的冷GVBE。然后混合反應(yīng)并離心 ,旋轉(zhuǎn)未裂解的細(xì)胞。然后在415 nm處分析上清液中釋放的血紅蛋白,并與不含C5的 空白細(xì)胞 (背景裂解對(duì)照) 和用275µL水代替GVB++和25µL C5-Dpl (100%裂解對(duì)照)  進(jìn)行比較。


許多其他的檢測(cè)方法已經(jīng)被描述為使用EA預(yù)加載C1 (EAC1細(xì)胞) 或預(yù)加載經(jīng)典 途徑C5轉(zhuǎn)化酶 (EAC1423細(xì)胞) 。然而,所有這些檢測(cè)方法都需要使用多種純化的補(bǔ) 體成分或更難以制備的試劑(Dodds,A。W.和Sim,R。B. (1997) ;摩根,B。P. (2 000)


參考文獻(xiàn)


Bauer, J., Podack, E.R. and Valet, G. (1979) Determination of the number of lytic sites in biconcave and spheroid erythrocyte ghosts after complement lysis. J. Immunol. 122:2032-2036.


Dodds, A.W. and Sim, R.B. editors (1997) Complement. A Practical Approach (ISBN 019963539) Oxford University Press, Oxford.


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